Monkeypox Virus reaalajas PCR komplekt

Lühike kirjeldus:

Kass.Ei	B001P-01	Suurus	48 Testid/komplekt
Näidis	Seerum/kahjustuse eksudaat	Trans.& Sto.Temp.	-25–15 ℃
Vorming	Eelsegu lüofiliseeriti ja jaotati alikvootidega 8 riba-PCR-tuubi
Kohaldatav instrument	Reaalajas PCR-instrumendid nagu ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio ja BTK-8

Saatke meile e-kiri

Toote üksikasjad

Tootesildid

Toote üksikasjad

Mõeldud kasutamiseks

Seda kasutatakse ahvirõugete viiruse tuvastamiseks inimese seerumi või kahjustuse eksudaadi proovides, kasutades reaalajas PCR süsteeme.

Testi põhimõte

See toode on fluorestsentssondil põhinev Taqman® reaalajas PCR-analüüsi süsteem.Ahvirõugete viiruse F3L geeni tuvastamiseks on loodud spetsiifilised praimerid ja sondid.Inimese konserveeritud geenile suunatud sisekontroll jälgib proovide kogumist, proovide käitlemist ja reaalajas PCR-i protsessi, et vältida valenegatiivseid tulemusi.Komplekt on täielikult eelsegatud lüofiliseeritud süsteem, mis sisaldab ahvipoksiviiruse tuvastamiseks vajalikke materjale: nukleiinhappe amplifikatsiooniensüümi, UDG ensüümi, reaktsioonipuhvrit, spetsiifilist praimerit ja sondi.

Põhisisu

Pakutud komponendid on loetletud tabelis.

Komponendid	pakett	Koostis
Ahvirõugete viirusLüofiliseeritud eelsegu	8 ribaga PCR katsutit× 6 kotti	Praimerid, sondid, dNTP/dUTP segu, Mg2+, Taq DNA polümeraas, UDG ensüüm
MPV positiivne kontroll	400 μL × 1 toru	Sihtgeeni sisaldavad DNA järjestused
MPV negatiivne kontroll	400 μL × 1 toru	Inimese geenisegmenti sisaldavad DNA järjestused
Lahustuv lahus	1 ml × 1 tuub	Stabilisaator
Vastavussertifikaat	1 tükk	/

Operatsioon Flow

1. NäidisKollektsioon:Proov tuleb koguda steriilsetesse katsutitesse vastavalt

standardsete tehniliste näitajatega.

2. Reaktiivi ettevalmistamine (reaktiivi ettevalmistamise ala)

Võtke komplekti komponendid välja, tasakaalustage need ooterežiimis kasutamiseks toatemperatuuril.

3. Proovide töötlemine (proovi töötlemise ala)

3.1 Nukleiinhapete ekstraheerimine

Nukleiinhapete ekstraheerimiseks on soovitatav võtta 200 μL vedelaid proove, positiivset kontrolli ja negatiivset kontrolli vastavalt viiruse DNA ekstraheerimiskomplektide vastavatele nõuetele ja protseduuridele.

3.2 Lüofiliseeritud pulbri lahustamine ja malli lisamine

Valmistage Monkeypox Virus Lyofiliseeritud eelsegu vastavalt proovide arvule.Üks proov vajab ühte PCR katsutit, mis sisaldab lüofiliseeritud eelsegu pulbrit.Negatiivset ja positiivset kontrolli tuleks käsitleda kahe proovina.

(1) Lisage 15 μL lahustavat lahust igasse lüofiliseeritud eelsegu sisaldavasse PCR katsutisse, seejärel lisage igasse PCR katsutisse vastavalt 5 μL ekstraheeritud proove / negatiivset kontrolli / positiivset kontrolli.

(2) Katke PCR-tuubid tihedalt kinni, nipsake PCR-tuube käsitsi, kuni lüofiliseeritud pulber on täielikult lahustunud ja segunenud, koguge vedelik PCR-katsuti põhja, kasutades hetkelist madalal kiirusel tsentrifuugimist.

(3) Kui kasutate tuvastamiseks tavalist reaalajas PCR-seadet, kandke PCR-tuubid otse amplifikatsioonipiirkonda;kui kasutate tuvastamiseks BTK-8, peate tegema järgmised toimingud: kandke 10 μL vedelikku PCR-torust BTK-8 reaktsioonikiibi süvendisse.Üks PCR-tuub vastab ühele kiibi süvendile.Pipeteerimise ajal veenduge, et pipett oleks vertikaalselt 90 kraadi.Aerosoolitõkkepipetiotsad tuleb asetada süvendi keskele mõõduka jõuga ja lõpetada pipeti vajutamine, kui see jõuab esimese käiguni (mullide vältimiseks).Pärast süvendite täitmist eemaldage reaktsioonikiibi membraan, et katta kõik süvendid, ja seejärel kantakse kiip amplifikatsiooni tuvastamise piirkonda.

4. PCR amplifikatsioon (tuvastusala)

4.1 Asetage PCR-tuubid/reaktsioonikiip reaktsioonipaaki ja määrake iga reaktsioonikaevu nimed vastavas järjekorras.

4.2 Tuvastamise fluorestsentsi sätted: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Sisekontroll (CY5).

4.3 Käivitage järgmine rattasõidu protokoll

ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio protokoll:

Sammud		Temperatuur	Aeg	Tsüklid
1	Eeldenatureerimine	95℃	2 minutit	1
2	Denatureerimine	95℃	10 s	45
2	Lõõmutamine, pikendamine, fluorestsentsi omandamine	60℃	30 s	45

BTK-8 protokoll:

Sammud		Temperatuur	Aeg	Tsüklid
1	Eeldenatureerimine	95℃	2 minutit	1
2	Denatureerimine	95℃	5 s	45
2	Lõõmutamine, pikendamine, fluorestsentsi omandamine	60℃	14 s	45

5. Tulemuste analüüs (vt instrumendi kasutusjuhendit)

Pärast reaktsiooni salvestatakse tulemused automaatselt.Analüüsimiseks klõpsake "Analüüsi" ja seade tõlgendab automaatselt iga proovi Ct väärtusi tulemuste veerus.Negatiivsed ja positiivsed kontrolli tulemused peavad vastama järgmisele "6. Kvaliteedikontroll".

6. Kvaliteedi kontroll

6.1 Negatiivne kontroll: Ct puudub või Ct>40 FAM kanalis, Ct≤40 CY5 kanalis normaalse võimenduskõveraga.

6.2 Positiivne kontroll: Ct≤35 FAM kanalis normaalse võimenduskõveraga, Ct≤40 CY5 kanalis normaalse amplifikatsioonikõveraga.

6.3 Tulemus kehtib, kui kõik ülaltoodud kriteeriumid on täidetud.Vastasel juhul on tulemus kehtetu.

Tulemuste tõlgendamine

Võimalikud on järgmised tulemused:

	FAM-kanali Ct väärtus	CY5 kanali Ct väärtus	Tõlgendus
1#	Ct puudub või Ct>40	≤40	Ahvirõuge viirus negatiivne
2#	≤40	Mis tahes tulemused	Ahvirõuge viirus positiivne
3#	40-45	≤40	Uuesti testida;kui see on endiselt 40–45, teatage kui 1#
4#	Ct puudub või Ct>40	Ct puudub või Ct>40	Kehtetu

MÄRGE: kehtetu tulemuse korral tuleb proov koguda ja uuesti testida.

Tellimuse teave

tootenimi	Kass.Ei	Suurus	Näidis	Säilitusaeg	Trans.& Sto.Temp.
Monkeypox Virus reaalajas PCR komplekt	B001P-01	48 testi/komplekt	Seerum/kahjustuse eksudaat	12 kuud	-25–15 ℃